La metodica in questione permette di studiare le microparticelle in termini di fenotipo e contenuto di citochine da parte delle cellule Natural Killer post opportuna stimolazione in vitro. 6.2 Background dell’invenzione: descrivete i sistemi o metodi dei quali siete a conoscenza che rappresentano l’arte nota su cui è basata l’invenzione, dettagliando anche gli eventuali svantaggi ad essi correlati. Le cellule Natural Killer (NK) appartengono al compartimento dell’Immunità innata e giocano un ruolo importante nella difesa da virus, batteri, cellule tumorali. Nell’uomo rappresentano circa il 5-10% dei linfociti circolanti nel sangue periferico e si suddividono in due subset: le CD56bright e le CD56dim. I due subset fenotipicamente si differenziano per la presenza/assenza sulla loro superficie di recettori attivatori od inibitori (NKp30, NKp46, NKp44, LIR, KIRs). Dalla letteratura emerge, inoltre che i due subset di cellule NK mostrano funzioni differenti: le cellule CD56bright appaiono come le principali secretrici di citochine/chemochine mentre le cellule NK CD56dim hanno prevalentemente funzione citotossica. (Moretta L, 2004; Vivier E, 2011). Infezioni croniche da virus quali HIV, HCV and TB possono alterare il fenotipo e la funzione delle cellule NK. (De Maria 2003; Bozzano F, 2011; Marras F, 2013). Le MPs sono rilasciate dalla maggior parte delle cellule eucariotiche e serivono come vettori di segnali a lungo o corto raggio facilitando lo scambio di informazioni tra cellule donatrici e riceventi (Deathrage BL, 2012; Gyorgy B, 2011; Jaiswal R, 2012; Jaiswal R, 2013). Le MPs sono piccole frammenti chiusi di membrana plasmatica con dimensioni che variano da 0,1 a 1 micron e tipicamente esprimono fostatidil serina (PS). Approcci analitici per l’analisi di fenotipo e funzione comprendono Western Blot , flow cytometri (FACS) o globalmente analisi di proteomica (Editorial J of Extracellular vesicles, 2014; Erdbrugger U, 2014). La letteratura descrive l’analisi delle MPs da differenti popolazioni presenti nel sangue perifierico ed i dati in possesso delle comunità scientifica sono inseriti in database disponibili online (es www. microvesicles.org). Nessun dato comprende la caratterizzazione di MPS da cellule NK. La nostra invenzione permette, con assoluta novità, di evidenziare le MPs rilasciate da parte cellule NK, caratterizzarle funzionalmente e fenotipicamente. Inoltre questa metodica per la prima volta permette l’analisi di MPS, la loro identificazione, attività funzionale e l’identificazione delle molecole trasportate sia in sopranatanti di coltura che nel plasma e prevede la possibilità di giungere alla loro separazione. _____________________________________________________________________________
Method for the identification of the microparticles relased by natural-killer cells and uses thereof.
bozzano federica;marras francesco;de maria andrea
2016-01-01
Abstract
La metodica in questione permette di studiare le microparticelle in termini di fenotipo e contenuto di citochine da parte delle cellule Natural Killer post opportuna stimolazione in vitro. 6.2 Background dell’invenzione: descrivete i sistemi o metodi dei quali siete a conoscenza che rappresentano l’arte nota su cui è basata l’invenzione, dettagliando anche gli eventuali svantaggi ad essi correlati. Le cellule Natural Killer (NK) appartengono al compartimento dell’Immunità innata e giocano un ruolo importante nella difesa da virus, batteri, cellule tumorali. Nell’uomo rappresentano circa il 5-10% dei linfociti circolanti nel sangue periferico e si suddividono in due subset: le CD56bright e le CD56dim. I due subset fenotipicamente si differenziano per la presenza/assenza sulla loro superficie di recettori attivatori od inibitori (NKp30, NKp46, NKp44, LIR, KIRs). Dalla letteratura emerge, inoltre che i due subset di cellule NK mostrano funzioni differenti: le cellule CD56bright appaiono come le principali secretrici di citochine/chemochine mentre le cellule NK CD56dim hanno prevalentemente funzione citotossica. (Moretta L, 2004; Vivier E, 2011). Infezioni croniche da virus quali HIV, HCV and TB possono alterare il fenotipo e la funzione delle cellule NK. (De Maria 2003; Bozzano F, 2011; Marras F, 2013). Le MPs sono rilasciate dalla maggior parte delle cellule eucariotiche e serivono come vettori di segnali a lungo o corto raggio facilitando lo scambio di informazioni tra cellule donatrici e riceventi (Deathrage BL, 2012; Gyorgy B, 2011; Jaiswal R, 2012; Jaiswal R, 2013). Le MPs sono piccole frammenti chiusi di membrana plasmatica con dimensioni che variano da 0,1 a 1 micron e tipicamente esprimono fostatidil serina (PS). Approcci analitici per l’analisi di fenotipo e funzione comprendono Western Blot , flow cytometri (FACS) o globalmente analisi di proteomica (Editorial J of Extracellular vesicles, 2014; Erdbrugger U, 2014). La letteratura descrive l’analisi delle MPs da differenti popolazioni presenti nel sangue perifierico ed i dati in possesso delle comunità scientifica sono inseriti in database disponibili online (es www. microvesicles.org). Nessun dato comprende la caratterizzazione di MPS da cellule NK. La nostra invenzione permette, con assoluta novità, di evidenziare le MPs rilasciate da parte cellule NK, caratterizzarle funzionalmente e fenotipicamente. Inoltre questa metodica per la prima volta permette l’analisi di MPS, la loro identificazione, attività funzionale e l’identificazione delle molecole trasportate sia in sopranatanti di coltura che nel plasma e prevede la possibilità di giungere alla loro separazione. _____________________________________________________________________________
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