Questo lavoro si propone di sviluppare un metodo di analisi in GC-EI-MS/MS per la quantificazione dell’EtG su matrice cheratinica, attraverso un approfondito lavoro di design sperimentale per l’ottimizzazione delle condizioni di pretrattamento ed estrazione del campione. Il metodo validato ed ottimizzato viene quindi applicato su una serie di campioni reali per valutarne l’adeguatezza nel fornire risultati che possano essere correlati con le abitudini dichiarate dai soggetti sottoposti ad analisi. La bontà del metodo viene ulteriormente valutata confrontando i dati ottenuti con quelli ottenuti da un secondo metodo, già validato ed in uso presso il Centro Anti Doping di Orbassano. Un secondo metodo di analisi per il fosfatidil etanolo su sangue capillare viene a sua volta sviluppato con una metodica UHPLC-ESI-MS/MS. Il metodo è stato utilizzato per analizzare campioni di sangue prelevati da alcuni soggetti per cui l’analisi dell’EtG nei capelli era già stata portata a termine. Questa fase ha permesso di valutare la correlazione tra i dati ottenuti per due marcatori diretti del consumo di alcol su due matrici, permettendo una valutazione del comportamento dei soggetti sul medio e sul lungo termine. Questa fase dello studio riveste particolare interesse, dal momento che correla dati ottenuti su matrici diverse e per analiti diversi con tecniche differenti, dimostrando che entrambi i marcatori sono adatti a valutare e categorizzare i soggetti in base al loro comportamento alcolico. L’analisi dei data è stata svolta con sofware di calcolo come Excell ed R, servendosi di metodi statistici avanzati come il design sperimentale, l’utilizzo di box plot, l’analisi dei cluster e svariati test di significatività statistica. Per finire, entrambi i metodi sviluppati sono stati applicati a campioni di soggetti affetti da neoplasie delle vie digestive e respiratorie superiori, ovvero tumori al cavo orale, alla lingua, all’orofaringe, all’ipofaringe ed alla laringe. Lo sviluppo della malattia, la prognosi e la speranza di vita sono state correlate con i valori degli indicatori di consumo alcolico, con la speranza di evidenziare una correlazione tra questi parametri e gli stili di vita dei pazienti antecedenti alla diagnosi.
Development and validation of advanced analytical methods for alcohol biomarkers’ analysis and application on real samples from cancer patients
S. Gariglio;
2022-01-01
Abstract
Questo lavoro si propone di sviluppare un metodo di analisi in GC-EI-MS/MS per la quantificazione dell’EtG su matrice cheratinica, attraverso un approfondito lavoro di design sperimentale per l’ottimizzazione delle condizioni di pretrattamento ed estrazione del campione. Il metodo validato ed ottimizzato viene quindi applicato su una serie di campioni reali per valutarne l’adeguatezza nel fornire risultati che possano essere correlati con le abitudini dichiarate dai soggetti sottoposti ad analisi. La bontà del metodo viene ulteriormente valutata confrontando i dati ottenuti con quelli ottenuti da un secondo metodo, già validato ed in uso presso il Centro Anti Doping di Orbassano. Un secondo metodo di analisi per il fosfatidil etanolo su sangue capillare viene a sua volta sviluppato con una metodica UHPLC-ESI-MS/MS. Il metodo è stato utilizzato per analizzare campioni di sangue prelevati da alcuni soggetti per cui l’analisi dell’EtG nei capelli era già stata portata a termine. Questa fase ha permesso di valutare la correlazione tra i dati ottenuti per due marcatori diretti del consumo di alcol su due matrici, permettendo una valutazione del comportamento dei soggetti sul medio e sul lungo termine. Questa fase dello studio riveste particolare interesse, dal momento che correla dati ottenuti su matrici diverse e per analiti diversi con tecniche differenti, dimostrando che entrambi i marcatori sono adatti a valutare e categorizzare i soggetti in base al loro comportamento alcolico. L’analisi dei data è stata svolta con sofware di calcolo come Excell ed R, servendosi di metodi statistici avanzati come il design sperimentale, l’utilizzo di box plot, l’analisi dei cluster e svariati test di significatività statistica. Per finire, entrambi i metodi sviluppati sono stati applicati a campioni di soggetti affetti da neoplasie delle vie digestive e respiratorie superiori, ovvero tumori al cavo orale, alla lingua, all’orofaringe, all’ipofaringe ed alla laringe. Lo sviluppo della malattia, la prognosi e la speranza di vita sono state correlate con i valori degli indicatori di consumo alcolico, con la speranza di evidenziare una correlazione tra questi parametri e gli stili di vita dei pazienti antecedenti alla diagnosi.
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